高效液相色谱仪.ppt

在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。常用溶剂的极性顺序：水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六环>四氢呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>异丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)3.流动相选择第32页,共53页，2024年2月25日，星期天4.选择流动相时应注意的几个问题液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外，如配位色谱等)流动相的黏度要尽量小，以便降低柱压，延长色谱柱使用的寿命避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。第33页,共53页，2024年2月25日，星期天流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法正常进行。在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。第34页,共53页，2024年2月25日，星期天?溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到作用，消除由于污染对分析结果的影响。对色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。对仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。5.流动相过滤流动相在混合前分别滤过，特别要注意分清有机相滤膜和水相滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解！溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。第35页,共53页，2024年2月25日，星期天流动相脱气的目的使色谱泵的输液准确输液均匀准确，并且脉动减小保留时间及色谱峰面积的重现性提高提高检测的性能防止气泡引起的尖峰基线稳定，信噪比增加溶剂的紫外吸收本底降低保护色谱柱减少死体积防止填料的氧化6.流动相的脱气第36页,共53页，2024年2月25日，星期天常用的脱气方法氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好，但成本高。加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。抽真空脱气法：易抽走有机相。超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波振荡10-15min。在线真空脱气法（实时在线脱气，效果好）第37页,共53页，2024年2月25日，星期天五、HPLC应用1.分析方法如何建立？色谱柱和检测器的选择根据被分离物质性质选择；参考文献类似物质疏水性的样品——反相键合色谱；亲水性的样品——正相键合色谱；流动相组成,配比,流量,梯度洗脱的选择根据分析样品的结构、性质，并查阅相关文献确定流动相组成。为达到较好的分离效果，确定流动相配比。当样品中溶质组分较多及不同溶质的性质差别较大时，考虑梯度洗脱。当分析弱酸，弱碱性化合物时，可通过采用缓冲溶液及加醋酸、三乙胺等调节流动相的pH值来改善峰型。第38页,共53页，2024年2月25日，星期天样品组分保留值和容量因子的选择分析时间最好控制在10～30min容量因子控制在1～10；对于容量因子范围较宽的通常使用梯度洗脱技术。相邻组分分离度的要求：对于难分离的样品，要求分离度R≥1.0样品分析方法流动相的准备过滤：用孔径为0.22μm（0.45μm)滤膜过滤除去固体颗粒杂质。

脱气：超声脱气，吹氦脱气，抽真空脱气法，在线真空脱气法样品的准备

称量，用流动相超声溶解，过滤或高速离心第39页,共53页，2024年2月2